Purificación de un anticuerpo monoclonal anti-Erns y su conjugación a peroxidasa de rábano picante para su uso en inmunoensayos
Fecha
2019
Autores
Rojo Sánchez, Alianny Lázara
Título de la revista
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Editor
Universidad Central "Marta Abreu" de Las Villas. Facultad de Química y Farmacia. Departamento de Licenciatura en Química
Resumen
Con el objetivo de obtener un anticuerpo monoclonal conjugado a peroxidasa de rábano picante contra la proteína recombinante Erns del Virus de la Peste Porcina Clásica, se purificó mediante cromatografía de afinidad a Proteína A y Proteína G inmunoglobulinas anti-Erns en ascitis. La conjugación se realizó según el método del peryodato de sodio. Tres factores fueron evaluados en la purificación (pH, velocidad de flujo y tampón de unión), para determinar la capacidad dinámica de unión, así como las condiciones de elución. Se evaluó el pulido de la elución con las matrices Q-Sepharose, Chelating Sepharose (Fe2+) y Blue-Sepharose. La inmunoglobulina fue conjugada a peroxidasa de rábano picante y su actividad fue evaluada mediante ELISA y Western-Blot.
With the aim to obtain a horseradish peroxidase conjugated antibody against a recombinant Erns from Classical Swine Fever Virus, anti-Erns immunoglobulins from ascites fluid were purified through Protein A and Protein G affinity chromatography. Three binding factors were assessed (pH, flow rate and buffer), to define dynamic binding capacity and elution conditions. The polish of eluted fractions was performed with Q-Sepharose, Chelating Sepharose (Fe2+) and Blue-Sepharose resins. The conjugation process to horseradish peroxidase was performed according to sodium periodate method and the activity was tested by ELISA and Western-Blot.
With the aim to obtain a horseradish peroxidase conjugated antibody against a recombinant Erns from Classical Swine Fever Virus, anti-Erns immunoglobulins from ascites fluid were purified through Protein A and Protein G affinity chromatography. Three binding factors were assessed (pH, flow rate and buffer), to define dynamic binding capacity and elution conditions. The polish of eluted fractions was performed with Q-Sepharose, Chelating Sepharose (Fe2+) and Blue-Sepharose resins. The conjugation process to horseradish peroxidase was performed according to sodium periodate method and the activity was tested by ELISA and Western-Blot.
Descripción
Palabras clave
Anticuerpo Monoclonal, Proteína Recombinante, Inmunoglobulinas, Purificación, Rábano Picante