Obtención de plantas transgénicas de arroz (Oryza sativa L., var. J-104) libres del gen marcador de selección, mediante co-transformación biobalística - Lorenzo Salinas, Daylenis (Universidad Central ´´Marta Abreu´´ de Las Villas, 2014)
Este trabajo describe un procedimiento de co-transformación biobalística para obtener plantas transgénicas de arroz (var. Jucarito-104) libres del gen marcador de selección. Para el bombardeo se utilizaron callos embriogénicos de 3-4 mm de diámetro, sometidos a un tratamiento previo con manitol 0,8 M. Se emplearon partículas de oro de 1 μm, y una mezcla 4:1 de los plásmidos pA9uidA y p35SHyg, portadores del gen reportero uidA y del hpt para la resistencia a higromicina, respectivamente. Se fijó una distancia de disparo de 6 cm entre la malla retenedora y el material vegetal, se utilizaron discos de ruptura de 1100 psi y condiciones de vacío de 27 pulgadas de mercurio. Los callos transformados y los controles no transformados se situaron en medio de cultivo con 50 mg/L de higromicina hasta la regeneración de las plantas, que luego se transfirieron a medio de cultivo semisólido con sales MS y el antibiótico. Se realizó PCR y tinción GUS para verificar las plantas portadoras de ambos genes co-transformados. Seis líneas con esas características fueron trasplantadas a tierra en una casa de cultivo y de ellas se obtuvieron semillas fértiles. La pesquisa de las plantas libres del marcador de selección y el análisis de segregación del uidA y hpt en la progenie T1 se realizaron en plantas de cuatro de las seis líneas, germinadas en medio de cultivo semisólido con sales MS, sin higromicina. En todas las líneas evaluadas se encontraron plantas libres del gen marcador de selección y que expresaron de forma estable el uidA. Las cuatro posibilidades de integración de estos genes fueron: GUS(+)/hpt(+), GUS(-)/hpt(+), GUS(+)/hpt(-) y GUS(-)/hpt(-) y no segregaron de forma mendeliana 9:3:3:1 en ninguna de las líneas en estudio, lo cual podría responder a efectos posicionales o mecanismos genéticos de integración parcial, duplicación o deleción inducidos por el propio evento de transformación. Como ha sido una transformación biobalística pudo ocurrir la integración de varias copias de los transgenes, y esto se asocia a fenómenos de silenciamiento génico, pero esto deberá comprobarse en estudios moleculares futuros.
Keywords: Arroz; Biobalística; Co-transformación (Biología); Marcador de Selección (Biología)