Ramírez González, SureyRodríguez Salgado, Eileen2019-10-252019-10-252019https://dspace.uclv.edu.cu/handle/123456789/11864Con el objetivo de obtener un anticuerpo monoclonal conjugado a peroxidasa de rábano picante contra la proteína recombinante Erns del Virus de la Peste Porcina Clásica, se purificó mediante cromatografía de afinidad a Proteína A y Proteína G inmunoglobulinas anti-Erns en ascitis. La conjugación se realizó según el método del peryodato de sodio. Tres factores fueron evaluados en la purificación (pH, velocidad de flujo y tampón de unión), para determinar la capacidad dinámica de unión, así como las condiciones de elución. La mejor combinación de factores para Proteína A fue en tampón fosfato (pH 8,0) a una velocidad de flujo de 78 cm/h, con una adsorción de 6,6 mg/mL de matriz y una pureza del 90 %; mientras que para Proteína G fue en tampón fosfato (pH 7,0) a una velocidad de flujo de 178 cm/h con 6,45 mg/mL de anticuerpo adsorbido y una pureza del 95 %. Se evaluó el pulido de la elución con las matrices Q-Sepharose, Chelating Sepharose (Fe2+) y Blue-Sepharose, mejorándose la pureza solo cuando se usó la matriz Q-Sepharose (desde 95,25 hasta 97,38 %). La inmunoglobulina fue conjugada a peroxidasa de rábano picante y su actividad fue evaluada mediante ELISA y Western-Blot. Se obtuvo un conjugado con una dilución de trabajo en un ELISA directo de 1:8000.With the aim to obtain a horseradish peroxidase conjugated antibody against a recombinant Erns from Classical Swine Fever Virus, anti-Erns immunoglobulins from ascites fluid were purified through Protein A and Protein G affinity chromatography. Three binding factors were assessed (pH, flow rate and buffer), to define dynamic binding capacity and elution conditions. The best binding condition to Protein A was in phosphate buffer, pH 8.0 and a linear flow of 78 cm/h with an adsorption of 6.6 mg/mL of matrix and a purity of 90 %. For Protein G, the best arrangement of factors was phosphate buffer, pH 7.0 and linear flow 178 cm/h with 6.45 mg/mL of adsorbed antibody with a purity of 95 %. The polish of eluted fractions was performed with Q-Sepharose, Chelating Sepharose (Fe2+) and Blue-Sepharose resins. Purity was just improved when Q-Sepharose was used (from 95.25 to 97.38 %). The conjugation process to horseradish peroxidase was performed according to sodium periodate method and the activity was tested by ELISA and Western-Blot. In direct ELISA the optimal working dilution was 1:8000.esEste documento es Propiedad Patrimonial de la Universidad Central “Marta Abreu” de Las Villas. Los usuarios podrán hacer uso de esta obra bajo la siguiente licencia: Creative Commons: Atribución-No Comercial-Compartir Igual 4.0 LicenseUEB Producciones MinerasVilla ClaraSuelosMetales PesadosRetención de Pb(II)Retención de As (III)Impacto AmbientalQuímica InorgánicaCromatografía de AfinidadThesis