Metodología para la escisión de genes marcadores de selección en plantas de Digitalis purpurea L. mediante el sistema Cre/lox

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dc.contributor.advisorChong Pérez, Borys
dc.contributor.authorKairuz Hernández Díaz, Elizabeth
dc.coverage.spatial1016432en_US
dc.date.accessioned2015-11-17T16:32:52Z
dc.date.available2015-11-17T16:32:52Z
dc.date.issued2013-06-18
dc.description.abstractLas plantas del género Digitalis se caracterizan por producir glucósidos cardiotónicos, medicamentos extensamente empleados a nivel mundial en el tratamiento de la insuficiencia cardíaca. Debido a que la transformación genética se considera una alternativa para potenciar la producción de metabolitos secundarios, se ha desarrollado un protocolo de modificación vía Agrobacterium tumefaciens de discos foliares de Digitalis purpurea. En este trabajo se seleccionó la mínima concentración letal de higromicina B (12 mg/L), durante la fase de inducción de callos, para su empleo como agente selectivo. Sin embargo, los genes relacionados con la resistencia a antibióticos no son necesarios luego del proceso de selección, además afectan la percepción pública y provocan problemas tecnológicos. Con el objetivo de desarrollar una metodología para la escisión de genes marcadores de selección en plantas de D. purpurea, se empleó el sistema recombinante sitio-específico Cre/lox guiado por un promotor inducible a golpe de calor. Primeramente, se estudió el efecto de la aplicación del golpe térmico (dos veces 2 h con 16 h de intervalo entre ellos ) en hojas y callos a 37, 40, 42 y 45°C. No se produjo regeneración de plantas en los explantes sometidos a 45°C, a diferencia de los restantes tratamientos. Los callos tratados a 40°C mostraron características morfológicas significativamente favorables y mayor eficiencia de regeneración, en comparación con los callos y hojas no sometidos a estrés por temperatura. Para comprobar la eficacia de las condiciones propuestas, se transformaron discos foliares de plantas cultivadas in vitro con el vector binario pAthsp-A. Luego del proceso de selección, realizado durante la formación y multiplicación de callos, se aplicó el golpe térmico a 40 y 42°C. Diez líneas de plantas regeneradas se analizaron mediante la reacción en cadena de la polimerasa. Fue posible comprobar la inducción del promotor y la escisión de los genes marcadores de selección a 42°C, en tres de las líneas. La metodología propuesta puede ser aplicada para la obtención de plantas transgénicas libres de marcadores de selección, que contengan un gen de interés para la sobreproducción de cardenólidos.en_US
dc.description.sponsorshipIntituto de Biotecnología de las Plantasen_US
dc.description.statusnon-publisheden_US
dc.identifier.urihttps://dspace.uclv.edu.cu/handle/123456789/3446
dc.language.isoesen_US
dc.publisherUniversidad Central ´´Marta Abreu´´ de Las Villasen_US
dc.rightsEste documento es Propiedad Patrimonial de la Universidad Central “Marta Abreu” de Las Villas.Los usuarios podrán hacer uso de esta obra bajo la siguiente licencia: CreativeCommons: Atribución-No Comercial-Compartir Igual 4.0 Licenseen_US
dc.subjectGenesen_US
dc.subjectMetabolitos Secundariosen_US
dc.subjectDigitalis Purpurea L.en_US
dc.titleMetodología para la escisión de genes marcadores de selección en plantas de Digitalis purpurea L. mediante el sistema Cre/loxen_US
dc.typeThesisen_US
dc.type.thesismasteren_US

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