Esición de genes marcadores de selección mediante el promotor REG-2 Inducible durante la embriogénesis somática en Banano CV. Grande Naine (Musa AAA)
Fecha
2012-06-15
Autores
Ramos Marzan, Adolfo
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Editor
Universidad Central ´´Marta Abreu´´ de Las Villas
Resumen
Un paso importante en la obtención de plantas transgénicas, es eliminar los genes marcadores de selección, ya que son causa de problemas tecnológicos y de rechazo por la opinión pública internacional. En banano se desarrolló un método para escindir estos genes mediante el sistema de recombinación Cre/lox guiado por promotores inducibles por golpe de calor. Sin embargo el golpe de calor trae consigo desventajas durante la obtención de las plantas transgénicas. Este trabajo tuvo como objetivo obtener plantas transgénicas de banano cultivar Grande naine (Musa AAA) libres de genes marcadores de selección mediante el sistema de recombinación Cre/lox guiado por el promotor REG-2, inducible en el desarrollo de embriones somáticos. Se evaluó la actividad del gen uidA guiado por el promotor REG-2 en diferentes momentos del proceso de obtención de plantas transgénicas. Se observó que el promotor solo se activó en embriones somáticos formados y maduros. Este promotor se clonó en el vector pGW-A para crear el vector de auto-escisión pREG2-A y transformar las suspensiones celulares embriogénicas de banano. Se comparó la eficiencia de transformación en medio selectivo con higromicina o geneticina, y se observó que no ocurrió la escisión prematura de los genes marcadores de selección, la relación de eficiencias en ambos antibióticos fue 1,03. Las plantas regeneradas fueron analizadas mediante Reacción en Cadena de la Polimerasa, hibridación por Southern y secuenciación para verificar la escisión de dichos genes y de la recombinasa Cre. Estos análisis mostraron la escisión del gen hpt con una eficiencia de 77.8 %.
Descripción
Palabras clave
Genes, Embriogénesis Somática, Musa