Predicción de la estabilidad de la proteína E2CD empleando métodos acelerados de estrés térmico

Abstract

El estudio de estabilidad de proteínas es un proceso indispensable en la actualidad para el desarrollo de productos vacunales que contienen a las mismas como principio activo. El presente trabajo se desarrolla en el Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología de Camagüey (CIGB), en el cual, actualmente en el área de desarrollo tecnológico se trabaja en el diseño de una vacuna contra la peste porcina clásica (PPC). La peste porcina clásica es una enfermedad viral altamente contagiosa y frecuentemente fatal que afecta tanto a los cerdos domésticos como salvajes. En la actualidad constituye un problema económico para los países afectados. El objetivo de este trabajo es determinar el tiempo de inactivación de la proteína E2CD, para ello se emplean estudios acelerados de estrés térmico para predecir la estabilidad de la vacuna contra la peste porcina clásica. Además se realizan diferentes estudios para analizar las posibles vías de inactivación de la proteína E2CD. Se obtuvo que a la temperatura de almacenamiento de la proteína como ingrediente farmacéutico activo, entre 2 °C y 8 °C, predictivamente posee un tiempo de durabilidad de aproximadamente 7,5 años antes que se inactive un 10 % de la misma. Sobre el análisis de las evidencias experimentales se obtuvo que la vía más probable de inactivación de la proteína es la desamidación de los residuos de asparagina (Asn) y glutamina (Gln) en la cadena aminoacídica.The study of protein stability is an essential process today for developing vaccine products containing it as active ingredient. This work is carried out at the Center for Genetic Engineering and Biotechnology of Camagüey (CIGB), which is currently working on the design of a vaccine against classical swine fever (CSF) in the area of technological development. Classical swine fever is a highly contagious and often fatal viral disease that affects both domestic and wild pigs. Today is an economic problem for the affected countries. The aim of this study is to determine the time of inactivation of the protein E2CD using thermal stress accelerated studies to predict the stability of the vaccine against classical swine fever. In addition different studies are conducted to analyze possible pathways of E2CD protein inactivation. Was obtained that the shelf life of the protein was approximately 7.5 years at the storage temperature between 2 ° C and 8 ° C before being inactivated 10% of the total amount. Evaluating experimental results was obtained that the most likely route of inactivation of the proteins is the deamidation of asparagine (Asn) and glutamine (Gln) residues in the amino acid chain.